概述

以指定培养基分离样品中可培养微生物，尽可能稀释至单培养体系单菌的培体养条件进行大规模、多培养体系的分离培养，将长菌的培养系收集后一部分保存用于后续培养或测试，一部分用于高通量测序，经高通量测序去重复后获得一定数量的OTU，将对应OTU的微生物划线后进行16S全长测序，鉴定至种。

服务内容

1. 健康动物的肠道内容物、粪便的分离培养，获得各物种各状态下的肠道微生物；

2. 对环境中的微生物进行研究，研究微生物环境的影响；

3. 对人源性样品中的微生物进行研究，分离常规或病理样本中的微生物；

4. 其他可在P2病原微生物实验室进行的各类样本。

维塔优势

1. 二级病原微生物实验室，保证样品和人员、环境的安全；

2. 采用高通量分离培养技术，一次性可培养10万株菌；

3. 具备多个厌氧工作站，为厌氧微生物提供严格厌氧环境；

4. 大量单一的培养体系降低了微生物之间的相互影响。优势菌和劣势菌的竞争。

实验流程

样品要求

新鲜样品可冷藏运输，冷冻样品应加入20%甘油混匀后冻存，或加入液氮迅速冷冻后转-80℃保存，避免冻融。

案例展示

样品：养殖海水

培养基：①1/10 Bcato Marine Broth 2216培养基，额外添加海盐至盐浓度为3%；

     ②TCBS培养基；

     ③R2A培养基；

     ④1/10 R2A培养基，额外添加海盐至盐浓度为3%；25℃，摇床转速为100 rpm，兼  性厌氧培养。

一、样品预处理

按要求将37管水样抽取部分混合，加入冻存液后涡旋混匀并分装至小管冻存。

二、预实验

取2~3管上述经过冷冻的样品，进行梯度的稀释，根据生长情况计算可培养密度。

三、正式实验

根据获得的可培养密度，稀释至合适的培养浓度分离至96孔板。

四、微生物收集

收集长菌孔至新的96孔板

五、DNA提取、PCR、电泳    

提取细菌基因组DNA，使用加了barcode的引物进行PCR，电泳。

电泳示例：

       养殖海水-1/10 2216 引物P1           养殖海水-R2A 引物P8

 六、纯化后混养送测序，结果统计共获得近200种单菌。

咨询热线

 杨经理 18587319039 ；王经理 15084964121